Entwicklung von Detektionssystemen für die HPLC-Bestimmung von Lipidhydroperoxiden / von Klaus Heitkamp. 1999
Inhalt
- Danksagung
- Inhaltsverzeichnis
- Verzeichnis der Abbildungen und Tabellen
- 0 Abstract
- 1 Einleitung - Vorkommen und Bedeutung von Lipidhydroperoxiden
- 2 Problemstellung und Zielsetzung der Arbeit
- 3 Theoretischer Teil
- 3.1 Synthesewege für Lipidhydroperoxide
- 3.1.1 Autoxidation
- 3.1.2 Oxidation mit Singulettsauerstoff
- 3.1.3 Enzymkatalysierte Oxidation
- 3.1.4 Chemoenzymatische Synthesewege für isomerenreine Lipidhydroperoxide
- 3.2 Eigenschaften von Lipidhydroperoxiden
- 3.3 Nachweis von Hydroperoxiden
- 4 Ergebnisse und Diskussion
- 4.1 Synthese von Referenzsubstanzen
- 4.1.1 Gewinnung von 9-Lipoxidase aus Kartoffeln; Synthese von 9-Hydroperoxyocta-decadiensäure
- 4.1.2 Synthese von 13S-Hydroperoxy-octadeca-9(Z),11(E)-diensäure und 13S-Hydro-peroxy-
- 4.1.3 Synthese von Hydroperoxyfettsäuremethylestern durch photosensibilisierte Oxi-dation
- 4.1.4 Synthese isomerenreiner Triglyceridhydroperoxide
- 4.1.5 Charakterisierung der synthetisierten Verbindungen
- 4.1.6 Diskussion der Ergebnisse
- 4.2 Vergleich verschiedener photometrischer Methoden zur Gehaltsbestimmung von
- 4.2.1 Vorüberlegungen und Vorversuche
- 4.2.2 Durchführung der Messungen
- 4.2.3 Diskussion der Ergebnisse
- 4.3 HPLC-Trennung von Lipidhydroperoxiden an Normalphasen
- 4.4 Entwicklung einer Detektionsmethode zum selektiven Nachweis von Lipidhydro-peroxiden
- 4.5 Entwicklung eines Enzymreaktors zur Detektion von Lipidhydroperoxiden in der
- 4.5.1 Allgemeines zur Immobilisierung von Enzymen
- 4.5.2 Bisherige Arbeiten zur Immobilisierung von Mikroperoxidase-11
- 4.5.3 Vorversuche
- 4.5.4 Immobilisierung von Mikroperoxidase-11
- 4.5.5 Bestimmung der Trägerbelegung
- 4.5.6 Packen der MP-11-Reaktoren
- 4.5.7 Bestimmung der MP-11-Aktivität
- 4.5.8 Optimierung des MP-11-Fluoreszenz-HPLC-Systems
- 4.5.9 Einsatz von MP-11-Reaktoren in der NP-HPLC
- 4.5.10 Diskussion der Ergebnisse
- 4.6 Untersuchung oxidierter Speiseöle mittels photometrischer Methoden und HPLC-Methoden
- 4.6.1 Einleitung
- 4.6.2 Zusammensetzung und Lagerung der Proben, Probenahme
- 4.6.3 Bestimmung des Wassergehaltes
- 4.6.4 Aufarbeitung der Proben
- 4.6.5 Photometrische Bestimmung der Lipidhydroperoxide in den Ölproben
- 4.6.6 Bestimmung des Hydroperoxidgehaltes der Ölproben mittels HPLC
- 4.6.7 Diskussion der Ergebnisse
- 5 Zusammenfassung und Ausblick
- 6 Anhang
- 6.1 Öl-, Linol- und Linolensäure und ihre isomeren Hydroperoxide
- 6.2 Verzeichnis der Abkürzungen
- 6.3 Chemikalienliste
- 6.4 Verzeichnis der verwendeten Geräte
- 6.5 NMR- und Massenspektren
- 6.5.1 9S-Hydroperoxyoctadeca-10(E),12(Z)-diensäure (I)
- 6.5.2 Hydroperoxide des Ölsäuremethylesters aus der photosensibilisierten Oxidation
- 6.5.3 Hydroperoxide des Linolsäuremethylesters aus der photosensibilisierten Oxida-tion
- 6.5.4 Hydroperoxide des Linolensäuremethylesters aus der photosensibilisierten Oxi-dation
- 6.5.5 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-diensäure (II)
- 6.5.6 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-diensäuremethylester (IV)
- 6.5.7 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E)-triensäure (III)
- 6.5.8 13S-Hydroperoxyoctadeca-9(Z),11(E),15(Z)-triensäuremethylester (V)
- 6.5.9 13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-diensäure-methyl-ester
- 6.5.10 13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-diensäure (VII)
- 6.5.11 2-[13S-(1-Methoxy-1-methylethylperoxy)-octadeca-9(Z),11(E)-dienoyl]-1,3-di-linolein
- 6.5.12 2-[13S-Hydroperoxy-octadeca-9(Z),11(E)-dienoyl]-1,3-dilinolein (IX)
- 6.6 Schematischer Aufbau der verwendeten HPLC-Anlagen
- 6.6.1 NP-HPLC mit UV-Detektion
- 6.6.2 Entwicklung und Optimierung eines Nachsäulenderivatisierungssystem für die
- 6.6.3 NP-HPLC mit Nachsäulenderivatisierung und UV/VIS-Detektion
- 6.6.4 Modifiziertes HPLC-System für Aktivitätsuntersuchungen von Enzymreaktoren
- 6.6.5 RP-HPLC mit gleichzeitiger UV/VIS- und Fluoreszenzdetektion bei Verwendung
- 6.6.6 RP-HPLC mit UV/VIS- und Fluoreszenzdetektion bei Verwendung des Enzym-reaktors
- 6.6.7 RP-HPLC mit nichtenzymatischer Nachsäulenderivatisierung und UV/VIS-Detektion
- 6.7 Lineare statistische Optimierung
- 6.8 Bestimmung der Trägerbelegung bei der Immobilisierung von Mikroperoxidase
- 6.9 Bestimmung oxidierter Pflanzenöle
- 6.9.1 Meßwerte FOX2-Test
- 6.9.2 Kalibriergeraden und Meßwerte der HPLC-Bestimmung mit UV- und Fluores-zenzdetektion
- 6.9.3 Kalibriergerade und Meßwerte der HPLC-Bestimmung mit nichtenzymatischer
- 6.10 Literaturverzeichnis