Abbau von Chloraromaten in Pseudomonas putida GJ31 und seinen Abkömmlingen : Charakterisierung von Genclustern auf den Plasmiden / vorgelegt von Kay Frank Thorsten Zerlin. 2004
Inhalt
- Meinen Eltern, meinem Bruder, meiner Familie und nicht zulet
- 1 Einleitung
- 1.1 Mikroorganismen als Helfer im Umweltbereich
- 1.2.2 Degradation von Catecholen: Der modifizierte ortho- u
- 1.3 Genetische Struktur von Abbauwegen und ihre Entstehung
- 1.3.1 Transposons
- 1.3.2 Integrons
- 1.3.3 Beispiele katabolischer Plasmide
- 1.4 Der Wildstamm P. putida GJ31 und sein Plasmid pKW1
- 2 Material und Methoden
- 2.1.2 Geräte
- 2.2 Biologische und Biochemische Methoden
- 2.2.1 Verwendete Organismen
- 2.2.2 Nährmedien zur Kultivierung von Pseudomonas sp. und E
- Mineralmedium nach Dorn et al. (1974)
- Mineralmedium Agar nach Dorn et al. (1974)
- LB-Medium nach Miller et al. (1972)
- LB-Agar nach Miller et al. (1972)
- SOB-Medium
- 2.2.3 Anzucht und Stammerhaltung
- Anzucht von Pseudomonaden
- 2.2.4 Trübungsmessung
- 2.2.5 High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
- 2.2.6 Gewinnung von zellfreiem Rohextrakt
- 2.2.7 Proteinbestimmung nach Bradford (1976)
- 2.2.8 Aktivität der 4-Oxalocrotonat Decarboxylase nach Hara
- 2.2.9 Aktivität der 4-Oxalocrotonat-Decarboxylase nach Sala
- 2.2.10 Aktivität der 4-Oxalocrotonat Tautomerase nach Sala-
- In eine 1 mL-Quarzküvette wurden Puffer u
- 1 mL Reaktionsansatz enthielt:
- 2.2.11 Aktivität der Catechol-2,3-Dioxygenase nach Nozaki (
- 2.2.12 Aktivität der 3,5-Cyclohexadien-1,2-diol-1-carbonsäu
- 2.3 Molekularbiologische Methoden
- 2.3.2 Verwendete Vektoren und Plasmide
- 2.3.3 Verwendete Oligonukleotide
- 2.3.5 Agarosegelelektrophorese
- 2.3.6 Isolierung von DNA aus Agarosegelen
- 2.3.7 Isolierung von Gesamt-DNA aus Pseudomonaden
- 2.3.8 Plasmidisolierung aus Pseudomonaden nach Wheatcroft u
- 2.3.10 Plasmidisolierung aus E. coli Stämmen
- 2.3.12 In vitro-Manipulation von DNA
- 2.3.16 Polymerasekettenreaktion (PCR)
- 2.3.19 DNA-Blotting nach Southern (1975)
- 2.3.20 DNA-DNA Hybridisierung mittels Digoxigenin (DIG)
- Markierung von DNA mittels Digoxigenin (DIG)
- Hybridisierungsreaktion mittels DIG-Sonde
- Fotografie
- Waschen von DIG-markierten Membranen
- Radioaktive Markierung von DNA mittels Ready-To-Go DNA Label
- Hybridisierungsreaktion mit 32P-markierter Sonde
- 3 Experimente und Ergebnisse
- 3.1.1 Generierung von P. putida GJ31* aus P. putida GJ31
- 3.1.2 Generierung von P. putida QM1 aus P. putida GJ31
- 3.1.3 Wachstum von P. putida GJ31 und seinen Abkömmlingen a
- 3.1.4 Isolierung der Plasmide pKW1, pKW2 und pZSG1
- 4 Diskussion
- 4.1 Gencluster in P. putida GJ31
- 6 Literatur
- Mise, K. 1971. Isolation and characterization of a new gener
- Shapiro, J. A. 1983. Mobile Genetic Elements. Academic Press
- Stokes, H. W. und Hall, R. M. 1989. A novel familiy of poten